一．实验材料
- 药品：牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖，
NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和饮料 - 仪器及玻璃器皿：玻璃棒、天平、高压蒸汽灭菌锅、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿等。
- 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
缺：玻璃棒，天平，烧杯，量筒（100ml），锥形瓶（2），药匙，
二．操作步骤
(一)玻璃器皿的洗涤和包装
1.玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馅水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2.灭菌前玻璃器皿的包装
培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
(二)固体培养基的配制过程
1.固体培养基的配制
（1）称量（假定配制500ml培养基）
按培养基配方比例依次准确地称取 1.5g牛肉膏、5.0g蛋白胨、2.5gNaCl，葡萄糖６g，放入烧杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
（2）溶化
在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约500ml）,用玻棒搅匀，配制固体培养基时，将称好的琼脂放人己溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。
（3）调PH
调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其 pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/LNaoH或1mol/LHCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边 搅拌，并不时用pH试纸测试，直至pH达7.4-7.6 反之，用1mol/LHCl进行调节。
配制固体培养基时，应将己配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼（1.5~2%）加 入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。
(三)培养基的分装
1.三角瓶的分装
用于振荡培养微生物时，可在250ml三角瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉（按2%计算），灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。
(四)棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎
为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。
1.三角瓶棉塞制作
通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。
在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。
(五)培养基的灭菌
将上述培养基以0.103MPa，121℃，20min高压蒸气灭菌。
(六)斜面和平板的制作
1.平板的制作
将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。
平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10~15mL培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。